OBRANA DOKTORSKOG RADA

Položaj rDNA lokusa u jezgri, organizacija rDNA kromatina i prisutnost specifičnih epigenetičkih oznaka pokazatelji su transkripcijske aktivnosti ili utišanosti rRNA gena. Istraživanjima provedenim u ovom doktorskom radu utvrđeno je da je u vrsti Q.robur, koja sadrži dva 18S-5.8S-26S rDNA lokusa, u normalnim fiziološkim uvjetima vjerojatno transkripcijski aktivan samo lokus NOR-1 koji pokazuje različite stupnjeve dekondenzacije kromatina, nalazi se uz jezgricu, boji se srebrom i hipometiliran je. Lokus NOR-2 je pak uvijek jako kondenziran, nalazi se udaljen od jezgrice često uz jezgrinu membranu, ne boji se srebrom, hipermetiliran je i obilježen epigenetičkim modifikacijama karakterističnim za heterokromatin što ukazuje na njegovu transkripcijsku utišanost. Tretman stanica korjenčića epigenetičkim inhibitorom 5-aza-2'-dC dovodi do hipometilacije rDNA kromatina NOR-2 lokusa i njegovog pomicanja bliže jezgrici, ali ne i do dekondenzacija rDNA kromatina. U procesu utišavanja rDNA lokusa u biljaka važnu ulogu imaju male interferirajuće RNA molekule (siRNA) koje nastaju prepisivanjem intergenske razmaknice (IGS) rRNA gena. Ovim istraživanjem utvrđeno je da u vrsti Q. robur postoje dvije dužinske varijante IGS-a, 2 kb i 4 kb dužinska varijanta. Dužinska varijanta od 4 kb sadrži promotor gena i promotor razmaknice s kojeg se vjerojatno prepisuju siRNA koje sudjeluju u utišavanju lokusa NOR-2 i dijela rRNA gena lokusa NOR-1. Upotrebom metode Nothern blot otkrivene su male siRNA dugačke 24 nk unutar ukupne RNA izolirane iz stanica korjenčića hrasta lužnjaka.