PAULA DOBRINIĆ, OBRANA DOKTORSKOG RADA
Naslov: Konstrukcija epigenetičkoga CRISPR/Cas9 sustava za ciljanu metilaciju specifičnih CpG mjesta
Petak, 23. rujna 2016. godine u 14,30 sati na Kemijskom odsjeku Prirodoslovno-matematičkog fakulteta,
Predavaonica A1, Horvatovac 102a, Zagreb
Povjerenstvo za obranu imenovano je u sastavu:
Doc. dr. sc. Aleksandar Vojta, PMF Zagreb
Izv. prof. dr. sc. Maja Matulić, PMF Zagreb
Prof. dr. sc. Srećko Gajović, MF Zagreb
Zamjena: Doc. dr. sc. Vjekoslav Tomaić, IRB Zagreb, PMF Zagreb
Mentor: Izv. prof. dr. sc. Vlatka Zoldoš, PMF Zagreb
Metilacija DNA važan je epigenetički mehanizam uključen u regulaciju aktivnosti genoma i normalan razvoj sisavaca. Metilacija CpG mjesta unutar regulatornih regija gena najčešće se povezuje s njihovim utišavanjem, no mehanizmi iza utvrđene korelacije nisu u potpunosti razjašnjeni. Precizne funkcionalne studije ograničene su nedostatkom metoda za ciljanu promjenu metilacijskih oznaka. U tu sam svrhu razvila fleksibilni molekularni alat za ciljanu metilaciju CpG mjesta unutar genomskog područja od interesa, temeljen na sustavu CRISPR/Cas9. Konstruirala sam fuzijski protein koji kombinira sposobnost vezanja specifične sekvence DNA s metiltransferaznom aktivnošću enzima DNMT3A. Konstruirani alat je u ljudskim stanicama u kulturi inducirao značajnu hipermetilaciju ciljanih CpG mjesta unutar promotora kandidat gena što je rezultiralo utišavanjem transkripcije istih. Uspostavljeni uzorak metilacije ovisi o mjestu vezanja i orijentaciji pridružene molekule RNA komplementarne ciljanom lokusu. Opisana metoda ima veliki potencijal u rasvjetljavanju uzročno-posljedične veze između metilacije DNA i regulacije ekspresije gena.
Pristupačnost