ANA BOKULIĆ - OBRANA DOKTORSKOG RADA

Naslov:

Izolacija i karakterizacija divljega tipa stanica MDCK s niskom zraženošću gena mdr1 i njihova primjena u istraživanju membranske propusnosti

Isolation and characterisation of MDCK cells with low expression of mdr1 gene and their use in membrane permeability screening

Utorak, 01. ožujak 2022. godine u 14,00 sati, u Vijećnici Biološkog odsjeka PMF-a,  Rooseveltov trg 6, Zagre

Povjerenstvo za obranu:

Prof. dr. sc. Domagoj Đikić, PMF, Zagreb

Izv. prof. dr. sc. Donatella Verbanac, Farmaceutsko-biokemijski fakultet, Zagreb

Dr. sc. Martina Bosnar, viša znan. suradnica, Fidelta d.o.o., Zagreb

Zamjena: dr.sc. Julija Erhardt, znan. suradnica, PMF, Zagreb

Mentor: dr. sc. Astrid Milić, znan. sur., Fidelta, Zagreb

Sažetak:

U ovoj disertaciji je opisana izolacija klona divljega tipa stanica MDCK s niskom izraženošću gena mdr1 koji kodira P-glikoprotein. Klonovi su izolirani metodom velikog razrjeđivanja, te uspoređeni mjerenjem dvosmjernog transporta prema razini efluksa amprenavira. Klon 79, koji je pokazao najmanji omjer efluksa amprenavira, kao i tri puta manju izraženost mRNA za mdr1 u odnosu na divlji tip (MDCK-WT), odabran je kao klon MDCK s niskim efluksom za daljnje istraživanje. Na standardnom setu spojeva klon 79 pokazao je znatno manji efluks od MDCK-WT, iako je kod nekih spojeva i dalje detektirana ostatna aktivnost P-glikoproteina.

Transport 12 makrocikličkih spojeva ispitan je na klonu 79 i nekoliko dodatnih staničnih linija, Caco-2, MDCK-MDR1, MDCK‑WT, te MDCK bez ekspresije P-glikoproteina. Nije uočeno značajno poboljšanje permeabilnosti makrolida u staničnim modelima s niskom ili bez izraženosti P-glikoproteina u odnosu na MDCK‑MDR1 i MDCK-WT stanični model. Proučen je utjecaj vremenske komponente na permeabilnost makrocikličkih spojeva u staničnom modelu dvosmjernog transporta. Dobiveni rezultati analizirani su multivarijantnim statističkim metodama, te su uspješno razvijeni modeli permeabilnosti i bioraspoloživosti.